[P-014]十脚甲殻類と昆虫類における汎用プライマーを用いたミトコンドリアゲノム全塩基配列決定法

発表者（所属）

山内　視嗣（東大海洋研）・宮　正樹（千葉中央博）・町田　龍二（東大海洋 研）・西田　睦（東大海洋研）

要旨

現在まで，多くの動物の mtDNA 全塩基配列が決定されているが，これまでの手法では，１種分の全塩基配列を決定するまでには多大な時間と労力を要した．われわれは，十脚甲殻類において，PCR を基本とする mtDNA 全塩基配列決定法を確立したのでここに報告する．この手法は，十脚類 mtDNA 用に設計した約 80 個の汎用プライマーを用い，1) mtDNA 全体をロング PCR で増幅； 2) そのロング PCR 産物を鋳型にしたショート PCR により互いに重なり合う40〜60 個の断片に増幅； 3) そのショート PCR 産物を直接法によりシーケンスという３つのステップからなる．この手法は，十脚類 mtDNA に対して開発した手法であるが，昆虫類にも有効であった．今回の発表では，クルマエビ (十脚類) とクロゴキブリ (昆虫類) の mtDNA 全塩基配列決定を例に本手法の概容を説明する．